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              細胞學堂 | 間充質干細胞(MSC)的鑒定方法

              更新時間:2023-05-31  |  點擊率:755


              間充質干細胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞,存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。在不同的誘導條件下,可以向除造血干細胞以外的,骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經等多種組織分化。間充質干細胞的易獲得、易擴增、多潛能等特性使其在再生醫學中的應用前景十分光明。


              對于體外培養的間充質干細胞的鑒定,通??梢愿鶕韵氯龡l標準進行驗證。




              01

              細胞形態學觀察

              可運用組織塊貼壁法、酶消化法以及兩種方法的結合分離出MSC,通過傳代培養后,進行形態學觀察。幾乎所有的MSC都是貼壁生長,具有較強的貼壁能力。MSC多數呈纖維細胞樣生長,少量呈梭形或不規則三角形。




              02

              表面標志物鑒定


              可采用流式細胞儀對MSC的細胞表型進行鑒定,MSC屬混雜細胞群,其表面抗原也具有非專一性, 它可同時表達間質細胞、內皮細胞和表皮細胞的表面標志,如粘附因子、生長因子和細胞因子受體以及整合素家族等。


              MSC的細胞表面標志物鑒定標準為:CD105、CD73和CD90的陽性率≥90%;而CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR呈陰性,陽性率≤5%。(如下圖)


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              流式細胞儀檢測 hUC-MSC 的表面標志物


              需要注意的是,陽性標記不具特異性,并非每個細胞都同時表達CD105、CD73和CD90。




              03

              多向分化潛能鑒定


              MSC具有分化為脂肪細胞、成骨細胞和軟骨細胞的能力,可通過特異性染色鑒定體外成脂、成骨和成軟骨誘導后的分化能力。

              成脂誘導分化鑒定

              細胞成脂分化誘導2周左右,于倒置顯微鏡下觀察,可見細胞質內出現油滴,經油紅O染色后為紅色。


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              成骨誘導分化鑒定

              細胞成骨分化誘導3周左右時,于倒置顯微鏡下觀察,可見不透明區域,經茜素紅染色后可見密集的紅色沉淀物呈結節狀。


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              成軟骨誘導分化鑒定

              細胞成軟骨分化誘導2周左右,于倒置顯微鏡下觀察,可見細胞經阿利新藍染色為淡藍色。


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              參考文獻

              [1] Fernández Vallone VB, Romaniuk MA, Choi H, Labovsky V, Otaegui J, Chasseing NA. Mesenchymal stem cells and their use in therapy: what has been achieved? Differentiation. 2013 Jan;85(1-2):1-10. 

              [2] 郭子寬. 間充質干細胞及其臨床應用中的幾個問題[J]. 中國組織工程研究與臨床康復, 2012, 16(1):10.

              [3] 張德雙, 陳娟. 人臍帶間充質干細胞的體外獲取、鑒定及標記. 華西醫學, 2015, 30(11): 2067-2070.


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